多数菌株能利用卫茅醇，少数菌株利用侧金盏花醇；约半数菌株不分解蔗糖。
一般不产生硫化氢，不分解尿素，不能利用丙肌醇。
吲哚和甲基红试验均为阳性，VP试验和枸橼酸盐利用试验均为阴性。
大多数菌株对水杨苷、D-山梨醇、棉籽糖发酵及七叶苷水解能力不定。
赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱发酶不定，苯丙氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶均为阴性。
大多数菌株能运动。
4.抗原及血清型
大肠杆菌抗原主要有O、K、H和F4种。
O抗原目前约有180种(其中162种与腹泻有关)，K抗原有103种，H抗原有60多种。
O抗原即菌体抗原，为细胞壁脂多糖最外层的特异性多糖(刺激机体主要产生IgM类抗体，出现早，消失快)，是血清学分类的基础。
K抗原即荚膜抗原，位于O抗原外层，为多糖，与细菌的侵袭力有关。
H抗原即鞭毛抗原，主要刺激机体产生IgG类抗体，与其他肠道细菌无交叉反应。
F抗原即菌毛抗原，至少有6种[F4(即K88)、F5(即K99)、F6(即987P)、F41、F17及F18]，其菌毛黏附素(fimbrial adhesion)与大肠杆菌的黏附作用有关。
通常用O：K：H排列表示大肠杆菌的血清型，如O8：K23：H19。
致人和幼龄动物腹泻的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)，除含酸性多糖K抗原外，还可含有蛋白质性黏附素抗原，故这类菌株的黏附素抗原应并列写于酸性多糖K抗原之后。
如O8：K87，K88：H19中K88即为黏附素抗原F4。ETEC中常见的K88、K99、987P黏附素又分别称为F4、F5、F6黏附素抗原。
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